PROCEDIMIENTO Y ANÁLISIS DE RESULTADOS LABORATORIO COLORACIÓN DE GRAM

PROCEDIMIENTO Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

Para realizar el laboratorio de coloración de Gram, se empezó por poner en tres portaobjetos con una gota de agua destilada cada uno, las colonias bacterianas, que correspondieron a Staphylococcus aureus, Escherichia Coli y una muestra con ambas bacterias. Se dejó secar a temperatura ambiente por cinco minutos cada una de las placas y luego se las fijó al calor pasando la dos o tres veces por el mechero, para después dejarse enfriar por tres minutos.

Luego se procedió a realizar la respectiva coloración de Gram, que es una tinción diferencial utilizada en microbiología para la observación de las bacterias. Se empezó por agregar a cada una de las placas el cristal violeta, el cual es de naturaleza básica y tiene por tanto afinidad por estructuras cargadas negativamente, como es el caso de la pared celular de la mayoría de las bacterias. El colorante penetra en la pared celular y la tiñe. Como consecuencia de este tratamiento tanto las bacterias grampositivas como las negativas aparecen teñidas de violeta. Se esperó un minuto, se lavó la placa con agua, se descartó el exceso y se cubrió el frotis con lugol, el cual se combina con el primer colorante y forma un complejo que es insoluble en el caso de los grampositivos. Este tratamiento no alteró la coloración que la muestra adquirió en el primer tratamiento. Después de un minuto se lavó de nuevo la placa con agua, y se cubrió con etanol al 95% con el fin de decolorar a las bacterias gramnegativas, pero no disolver el complejo formado en la pared celular de las bacterias grampositivas, que, por tanto, no pierden la coloración en este paso.

Y para terminar con la coloración de Gram, quince segundos después, se coloreó con safranina durante un minuto, el cual es un colorante básico de distinto color que el primer colorante, actuando como agente de contraste y tiñendo el frotis de color rojo y afectando solamente a las bacterias que han perdido previamente el colorante, es decir, a las gramnegativas, razón por la cual estas aparecerán de color rosa al microscopio.

Posteriormente se lavó con agua, y se dejaron secar las placas a temperatura ambiente, para luego agregar aceite de inmersión a cada una de las tres muestras y realizar la respectiva observación al microscopio con el objetivo de 100X. En primer lugar, se procedió a observar la placa correspondiente a Staphyulococcus aureus, evidenciándose claramente la tinción violeta que presentaron estas bacterias, dispuestas en racimos, aunque también se pueden encontrar en cadenas cortas o diplococos. Así, se definió a esta bacteria como grampositiva, por presentar el color descrito, infiriéndose además que los componentes fundamentales de su pared celular son el peptidoglicano y los ácidos teicoicos, presentándose el primero como el responsable de la mitad del peso de su pared celular, proporcionar estabilidad y forma al microorganismo y tener actividad de tipo endotoxina; mientras que los ácidos teicoicos, constituyendo el 40% del peso de la pared, median la unión del estafilococo a las superficies mucosas mediante uniones específicas a la fibronectina.

En la segunda placa, en la cual teñimos la muestra de la bacteria Escherichia Coli, unos de los muchos grupos de bacterias que viven en los intestinos de los humanos sanos y habitualmente en la vagina y en el tracto urinario, se observaron al microscopio como bacilos finos de color rosa por acción de la safranina, ya que al tener la pared con bajo contenido de peptidoglicano, que no suele sobrepasar el 5 al 10% de su peso, no pudieron retener el cristal violeta.

Y por último se observó la placa mixta, donde se pusieron en evidencia las bacterias Sthapylococcus aureus y Escherichia Coli, y tal como era de esperarse, se encontraron grupos de bacterias teñidas de color violeta (S. aureus), en mezcla con otras teñidas de color rosado (E. Coli),  evidenciándose aquí un diferencial útil para distinguir unas bacterias de otras, especialmente para procesos de tipo clínico.


CONCLUSIONES

Como resultado de la tinción de Gram, las bacterias grampositivas, correspondientes al estafilococo aureus quedaron teñidas de violeta, mientras que las gramnegativas, correspondientes a E. Coli aparecieron de color rojo. Este comportamiento diferente frente a la tinción de Gram obedeció a la diferente composición de la pared celular de los dos grupos bacterianos.

En el procedimiento de la tinción con Gram, se mostró que las bacterias grampositivas y gramnegativas se tiñeron en un principio con el cristal violeta, pero posteriormente el etanol fue el responsable de la decoloración de éstas últimas, y la safranina hizo su parte como agente de contraste para teñir las gram negativas que se encontraban decoloradas.

El Sthapylococcus aureus, bacterias aerobias y anaerobias facultativas, catalasa positivo y oxidasa negativo, se evidenciaron al microscopio como racimos color violeta por ser microorganismos grampositivos con gruesa capa de peptidoglicano. Se encuentran en la piel del individuo sano, pero al deteriorarse las defensas, puede causar enfermedad. Por su parte la Escherichia Coli, anaerobio facultativo, flagelado, habitante, en especial, del intestino humano, se presentó al microscopio con forma de bacilo y de color rosa.

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